Ⅹ型胶原(COL10)检测试剂盒实验原理

Ⅹ型胶原(COL10)检测试剂盒实验原理应用双抗体夹心法测定标本中Ⅹ型胶原(COL10)水平。用纯化的Ⅹ型胶原(COL10)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅹ型胶原(COL10)，再与HRP标记的Ⅹ型胶原(COL10)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅹ型胶原(COL10)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Ⅹ型胶原(COL10)浓度。 

操作步骤1.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
6.温育：操作同3。
7.洗涤：操作同5。
8.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
9.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10.Ⅹ型胶原(COL10)检测试剂盒实验原理测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。