容易造成ELISA试剂盒灵敏度低都有哪些原因

                                                容易造成ELISA试剂盒灵敏度低都有哪些原因

    近日，有客户在做完实验后，反映阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。这是什么原因造成的？我司技术整理后给出如下解析，邀您来看看！

    容易造成的原因：

    1.试剂盒必须在有效期内使用， 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；

    2.试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响；

    3.试剂、样品用前未平衡至室温；

    4.加入试剂的体积和时间有误，移液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁；

    5.洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力；

    6.孵育时间及孵育温度未达到要求 ，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整；

    7.洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求；洗涤冲击力太大。浸泡时间太长；

    8.显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入；

    9.底物作用时间不够；

    10.蒸馏水水质有问题。

 

    解决办法：

    1.实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期；

    2.不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏；

    3.确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当；

    4.校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应完全；

    5.确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染；

    6.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门，以免影响保温；

    7.严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数；

    8.显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂 A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入；

    9.准确定时；

    10.测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响。