原代细胞震撼来临
感谢上苍,让我在茫茫人海与你相遇;感谢大地让我在滚滚红尘相识了你;感谢风雨,让我有机会真诚地去庇护你;感谢有你,在我的生活中给了我鲜活的动力。是你的浪漫夸张情趣,为我们的爱情增添了浓情蜜意! 当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。
下列操作步骤:
:●准备一烧杯37°C的水。
● 从液氮储存中取出一管细胞,注意保护手和眼睛。
● 拧松管盖1/4圈,等待10秒钟以释放螺纹中可能残留的液氮,再重新拧紧管盖。
● 将冻存管的下半部分置于37°C水浴中进行解冻,直至冻存管内仅剩余一小块冰芯,使细胞迅速解冻。
● 用消毒液擦拭管体外表面,再将其移至II级A型层流细胞培养通风橱中。
● 打开管盖,使用1ML液器上下吹打细胞悬液以分散细胞。
台盼蓝染色
● 从管中吸取20细胞悬液,并将其稀释于20 L台盼蓝溶液中。
● 使用血细胞计数板来确定每毫升悬液中的活细胞数。
● 将管中悬液(1 )稀释至产品说明中的推荐浓度。
● 将5 细胞悬液加入25 cm2培养瓶,或将15细胞悬浮液加入75cm2培养瓶中。
● 摇匀培养瓶中的培养基以彻底分散细胞。许多类型的细胞都会迅速贴壁,如果没有在传代后即刻摇匀细胞,细胞可能生长不均匀。
● 在37°C、5% CO2/95%空气、湿度细胞培养箱中培养细胞。为了获得最佳结果,培养开始后至少在24小时之内不要扰动细胞。