小鼠癌胚抗原酶联免疫试剂盒操作流程说明

                                                        小鼠癌胚抗原酶联免疫试剂盒操作流程说明
秋是成熟的季节，是收获的季节，是充实的季节，却是澹泊的季节。它饱经了春之蓬勃与夏之繁盛，不再以受赞美被宠爱为荣。它把一切的赞美与宠爱都隔离在澹澹的秋光外，而只愿做一个闲闲的远远的可望而不可即的，秋。接下来介绍 小鼠癌胚抗原酶联免疫试剂盒操作流程说明

洗板方法:
1、手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4 mL注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。
2、自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪。
2. 自动洗板机。
3. 恒温箱
4. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器。
5. 干净的试管和 Eppendof 管。
6. 用去离子水将 25X 洗涤缓冲液稀释 25 倍，成 1X 洗涤缓冲液。
操作流程如下：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。