培养基的配制与灭菌说明

培养基的配制：

用量简移取大量元素母液l00mL，用专一对应的移液管分别吸取微量元素母液10mL、铁盐母液10mL、有机物母液10mL，均置入1000mL定容瓶中，若不加任何激素，则为MS配养基；若需加激素按配方移取激素母液即可。

将已装母液的定容瓶用蒸馏水或自来水定容到1000mL，取1／3左右倒入小铝锅中加热。同时，称好30g蔗糖，称琼脂丝7g(或琼脂粉)，也倾入小铝锅中，边加热边搅拌，防止糊底。旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全鄙融化即清澈见底为度(若用琼脂粉，应加入100mL，左右的液体培养基，并搅拌均匀)。然后再倾入定容瓶内余下的液体培养基，摇晃均匀即可。

培养基配好后，要调整pH值。用0．1mol／L的NaOH或HCI液调成pH值5．8左右。在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。可以将连续3次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以后调整的用量值。调后注意一定要摇动均匀，还要注意酸或碱液不要放置时间太久。

培养基的分装与灭菌：

培养基配好后要趁热分装，l00mL的容器约装入30～40mL培养基，即1L培养基约装35瓶左右。太多则浪费培养基，太少不易接种和影响生长。但要根据培养对象来决定。如果培养时间较长时，应适当多装培养基；生根等短期培养时，可适当少加培养基。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料包上瓶口，扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。

分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.1lMPa。

具体操作方法为：打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0．05MPa时，打开放气阀放气，气压指针回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0．1lMPa时，保压灭菌20～35min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好菌的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。