影响ELISA试剂盒实验质量的因素合集

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

ELISA实验的原理：

1、包被：抗原或者抗体能以物理性吸附于固相载体表面，原因是蛋白质和聚苯乙xi表面间的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反应等免疫活性：

2、标记：抗原或者抗体可通过共价键与酶连接成酶结合物而此种酶结合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特点：

3、显色：酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或抗体结合后，也被固定在固相载体上，加入酶的底物之后可出现显色反应，根据反应的颜色深浅可计算抗原或者抗体的相对含量。

ELISA试剂盒实验质量的影响因素如下：

1. 方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的竞争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。
2. 样本因素
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素，前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、等，后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。
3. 操作因素
ELISA操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。加样、温育、洗涤、显色、比色。
4. 试剂因素
不同批次的Elisa试剂盒在制作过程中很难保证质量*一致，即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性；对于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，避免反复冻融造成试剂的失效。
5. 灰区的设置
通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。
6. 标本复查
ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。
7. 常表示结果的常用方法
a.定性测定
b.半定量测定 结果一般以滴度表示。
c.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。