DNA 复制基本要素与过程

       聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一项利用 DNA 双链复制原理，在生物体外复制特定 DNA 片段的的核酸合成技术。可在短时间内大量扩增目的 DNA 片段，而不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。

    DNA 的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链 DNA 在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在 DNA 聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA 在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制 DNA 的变性和复性，加入设计引物，DNA 聚合酶，dNTP 就可以完成特定基因的体外复制，这是 PCR 的理论基础。PCR 反应是在体外模拟 DNA 的复制过程，因此反应体系中必须具有 DNA 复制所需的基本要素：

1、模板（template），含有需要扩增的 DNA 片段。

2、引物（primer），一对引物决定了需要扩增的起始和终止位置。

3、聚合酶（polymerase ），DNA 聚合酶复制需要扩增的区域。

4、脱氧核苷三磷酸（dNTP），用于构造新的互补链。

5、缓冲液（buffer），提供适合聚合酶行使功能的化学环境。

      PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3～4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。

具体过程：

1、把DNA加热，使双链分开；这是第一个不同，DNA复制时也解旋，在解旋酶的作用下进行，不能加热。

2、将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；这是第二个不同，DNA复制需要的引物是RNA,不是DNA。

3、按照引物就能够复制出DNA来，重复放大50次后就可以制成10亿个基因。在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。这是第三点不同，PCR技术形成DNA时用耐热DNA聚合酶，而DNA复制用的是生物体自身的DNA聚合酶，普通的DNA聚合酶是不耐热的。