标准曲线的制作及标准曲线样品检测注意事项

制作ELISA标准曲线, 以减去本底后的OD值为X轴，标准品的浓度为Y轴，利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图，比如CurveExpert 1.4。这款软件能够给出很多种方法（比如直线、半对数、对数、四参数方程等）并从中选择一条最合适的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据吻合，可以将标准品的浓度作为未知数，将对应的OD值带入该方程，计算出标准品的浓度，得到的结果应该与实际浓度很接近（+/-10%）。选择拟合度的那条曲线。

以下是CurveExpert1.4的使用过程：
1、将OD值和标准品浓度数据复制粘贴到表格中；
2、生成和选择标准曲线；
3、通过曲线计算样品浓度；
输入OD值，点击“计算"按钮，得到样品的准确浓度。
或者得到相关方程，通过excel来计算浓度。
如果需要导出方程，可点击“复制"，粘贴至excel中。
4、对于OD值落在标准曲线之外的情况。
如果样品的OD值超过标准曲线的值，在实验前应该先将样品稀释从而得到准确的浓度。样品的最终度应该是计算出的浓度乘以稀释倍数。
标准曲线样品检测注意事项：
1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。
2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。
3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。
5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。
6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.