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提高ELISA实验重复性的小技巧，你知道吗？
47 人阅读发布时间：2025-11-25 09:22
为了提高ELISA实验的重复性，需要从操作规范、样本与试剂管理以及质控与验证三个方面进行优化。
一、操作规范优化
1、加样与温育
使用校准后的移液器，避免气泡或交叉污染，严格遵循说明书控制温育时间（如37℃±0.5℃）。
加样后及时放入孵箱，封板需严密，防止阳性样本蒸发导致“花板”现象。
显色剂（如TMB）需临用前配制，避光操作，显色时间不宜过长。
2、洗涤与封闭
洗涤需彻底（建议5-6次，每次静置30秒），以降低背景噪音。
封闭需充分（如1%明胶37℃封闭1.5小时），避免非特异性结合
二、样本与试剂管理
1、试剂选择与保存
选择高特异性抗体对，标准品需参考国际或国家标准品，确保批间一致性。
试剂避免反复冻融，分装保存以维持活性；使用前需平衡至室温。
2、样本质量控制
避免溶血、细菌污染及反复冻融；血清样本中类风湿因子（RF）可通过热灭活（56℃ 30分钟）处理。
样本稀释时，稀释剂应尽可能与样本基质相似（如含BSA的PBS）。
三、质控与验证
1、质控指标监测
回收率应在80%-120%之间，稀释线性偏差需在80%-120%内，以评估样本基质干扰。
板内变异系数（CV）应<5%，板间CV<15%，确保结果稳定性。
2、对照设置
包括阴性对照（空白孔、样本阴性对照）和阳性对照（标准品或阳性样本），验证试剂活性。
通过规范操作流程、严格管理样本与试剂、加强质控监测，可显著提升ELISA实验的重复性。
一、操作规范优化
1、加样与温育
使用校准后的移液器，避免气泡或交叉污染，严格遵循说明书控制温育时间（如37℃±0.5℃）。
加样后及时放入孵箱，封板需严密，防止阳性样本蒸发导致“花板”现象。
显色剂（如TMB）需临用前配制，避光操作，显色时间不宜过长。
2、洗涤与封闭
洗涤需彻底（建议5-6次，每次静置30秒），以降低背景噪音。
封闭需充分（如1%明胶37℃封闭1.5小时），避免非特异性结合
二、样本与试剂管理
1、试剂选择与保存
选择高特异性抗体对，标准品需参考国际或国家标准品，确保批间一致性。
试剂避免反复冻融，分装保存以维持活性；使用前需平衡至室温。
2、样本质量控制
避免溶血、细菌污染及反复冻融；血清样本中类风湿因子（RF）可通过热灭活（56℃ 30分钟）处理。
样本稀释时，稀释剂应尽可能与样本基质相似（如含BSA的PBS）。
三、质控与验证
1、质控指标监测
回收率应在80%-120%之间，稀释线性偏差需在80%-120%内，以评估样本基质干扰。
板内变异系数（CV）应<5%，板间CV<15%，确保结果稳定性。
2、对照设置
包括阴性对照（空白孔、样本阴性对照）和阳性对照（标准品或阳性样本），验证试剂活性。
通过规范操作流程、严格管理样本与试剂、加强质控监测，可显著提升ELISA实验的重复性。