细胞传代不用愁！这份最佳实践手册，让细胞代代状态稳定

细胞传代是体外培养中的常规操作，旨在将细胞从旧培养环境转移至新环境，以维持其持续增殖能力并扩增数量。然而，不当操作易导致细胞应激、污染或表型改变，影响实验重复性。因此，遵循最佳实践对保证实验质量至关重要。

一、判断传代时机的核心指标

贴壁细胞：当细胞融合度达到70%–90%时为最佳传代时机，避免完全汇合导致接触抑制。

悬浮细胞：通过细胞密度和生长曲线判断，通常在对数期末期、活率>90%时传代。

观察要点：

l 培养基颜色变化（如酚红变黄提示酸化）；

l 细胞形态是否正常（避免出现变大、颗粒增多等老化迹象）；

l 是否出现聚集或漂浮死细胞。

二、不同类型细胞的传代处理方式

维度	贴壁细胞	悬浮细胞
传代方法	需胰蛋白酶/EDTA消化脱落	直接离心重悬分瓶
传代比例	通常1:2至1:4，依细胞系而定	多为1:2或按密度接种
关键注意点	控制消化时间，避免损伤细胞	注意防止过度震荡破坏细胞膜
代表性细胞系	HEK293、HeLa、RAW264.7	淋巴细胞、THP-1

（补充说明）对于特殊细胞如诱导多能干细胞（iPS），需更精细控制传代周期以维持未分化状态。

三、提升可重复性的操作建议

1、建立传代记录表：记录每次传代时间、比例、细胞状态、活率等，便于追踪代次与性能变化。

2、定期检测细胞活性：使用台盼蓝染色法评估，确保传代前活率≥90%。

3、控制传代次数：

原代细胞一般限于10–20代；

永生化细胞系虽可长期传代，但仍建议使用低代次细胞开展关键实验。

4、标准化操作流程：

所有试剂预热至37℃；

操作在超净台内完成，严格无菌。

建议

为确保细胞健康与实验一致性，应结合形态观察 + 生长曲线 + 活性检测综合判断传代时机，并坚持标准化记录与操作。对于敏感细胞系（如原代或iPS），建议采用虚拟仿真软件辅助培训，提升操作熟练度 。